ဖယောင်းတိုင်နှင့် ဆပ်ပြာပြုလုပ်ခြင်းအတွက် သန့်စင်သော Saposhnikovia divaricata ဆီ၊ ကျူမီးစက်အတွက် အသစ်သော ဆပ်ပြာဆီ၊

အတိုချုံးဖော်ပြချက်-

 

၂.၁။ SDE ပြင်ဆင်မှု

SD ၏အပင်များကို Hanherb Co. (Guri, Korea) မှ ဆေးဖက်ဝင်အပင်ခြောက်အဖြစ် ဝယ်ယူခဲ့သည်။ အပင်ထွက်ပစ္စည်းများကို Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM) မှ ဒေါက်တာ Go-Ya Choi မှ လူမျိုးစုအလိုက် အတည်ပြုခဲ့ပါသည်။ ဘောက်ချာနမူနာ (နံပါတ် 2014 SDE-6) ကို Standard Herbal Resources ၏ Korean Herbarium တွင် အပ်နှံထားပါသည်။ SD (320 ဂရမ်) ၏အခြောက်အပင်များကို 70% အီသနော (၂ နာရီကြာ reflux ဖြင့်) နှစ်ကြိမ် ထုတ်ယူခဲ့ပြီး ထုတ်ယူမှုကို လျှော့ချထားသောဖိအားအောက်တွင် စုစည်းထားသည်။ ဖျော်ရည်ကို စစ်ထုတ်ပြီး lyophilized နှင့် 4°C တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။ အကြမ်းစတင်ပစ္စည်းများမှ အခြောက်လှန်းထုတ်ယူမှု အထွက်နှုန်းမှာ ၄၈.၁၃% (w/w) ဖြစ်သည်။

 

၂.၂။ Quantitative High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။

ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို HPLC စနစ် (Waters Co., Milford, MA, USA) နှင့် photodiode array detector တို့ဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ SDE ၏ HPLC ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက်၊O-glucosylcimifugin စံကို Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea) မှ ဝယ်ယူခဲ့ပြီး၊စက္ကန့်-အို-glucosylhamaudol နှင့် 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol ကို ကျွန်ုပ်တို့၏ဓာတ်ခွဲခန်းအတွင်း သီးခြားခွဲထုတ်ပြီး NMR နှင့် MS တို့က အဓိကအားဖြင့် ရောင်စဉ်တန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများဖြင့် ခွဲခြားသတ်မှတ်ထားသည်။

SDE နမူနာများ (0.1 မီလီဂရမ်) ကို 70% အီသနော (10 mL) တွင် ပျော်ဝင်ခဲ့သည်။ Chromatographic ခွဲခြားခြင်းကို XSelect HSS T3 C18 ကော်လံ (4.6 × 250 မီလီမီတာ၊ 5) ဖြင့် လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်μm၊ Waters ကုမ္ပဏီ၊ Milford၊ MA၊ USA)။ မိုဘိုင်းအဆင့်တွင် ရေထဲတွင် acetonitrile (A) နှင့် 0.1% acetic acid (B) တို့သည် စီးဆင်းမှုနှုန်း 1.0 mL/min ပါ၀င်သည်။ Multistep gradient ပရိုဂရမ်ကို အောက်ပါအတိုင်းအသုံးပြုခဲ့သည်- 5% A (0 မိနစ်), 5–20% A (0–10 မိနစ်), 20% A (10–23 မိနစ်) နှင့် 20–65% A (23–40 မိနစ် ) ထောက်လှမ်းလှိုင်းအလျား 210-400 nm တွင် စကင်န်ဖတ်ပြီး 254 nm တွင် မှတ်တမ်းတင်ထားသည်။ ထိုးဆေးပမာဏမှာ 10.0 ဖြစ်သည်။μL. ခရိုမိုနီသုံးခုကို ဆုံးဖြတ်ခြင်းအတွက် စံဖြေရှင်းချက်များအား နောက်ဆုံးပြင်းအား 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol) နှင့် 31.125 mg/mL (စက္ကန့်-အို-glucosylhamaudol) မီသနောတွင် ၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ထားပါ။

၂.၃။ Anti-Inflammatory Activity ကို အကဲဖြတ်ခြင်း။Vitro တွင်

၂.၃.၁။ ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုနှင့် နမူနာကုသမှု

RAW 264.7 ဆဲလ်များကို American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) မှ ရယူခဲ့ပြီး 1% ပဋိဇီဝဆေးများနှင့် 5.5% FBS ပါဝင်သော DMEM ကြားခံတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ ဆဲလ်များကို 37°C တွင် စိုစွတ်သော CO2 5% ဖြင့် ပေါက်ဖွားခဲ့သည်။ ဆဲလ်များကို လှုံ့ဆော်ရန်အတွက် ကြားခံအား လတ်ဆတ်သော DMEM ကြားခံနှင့် lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 တွင် အစားထိုးခဲ့သည်။μSDE (200 သို့မဟုတ် 400) ရှိနေခြင်း သို့မဟုတ် မရှိခြင်းတွင် g/mL ကို ထည့်ထားသည်။μg/mL) နောက်ထပ် 24 နာရီ။

၂.၃.၂။ Nitric Oxide (NO)၊ Prostaglandin E2 (PGE2)၊ Tumor Necrosis Factor- ကို ဆုံးဖြတ်ခြင်းα(TNF-α), နှင့် Interleukin-6 (IL-6) ထုတ်လုပ်မှု

ဆဲလ်များကို SDE ဖြင့် ကုသပြီး 24 နာရီကြာ LPS ဖြင့် လှုံ့ဆော်ပေးခဲ့သည်။ ယခင်လေ့လာမှုတစ်ခုအရ Griess reagent ကိုအသုံးပြု၍ နိုက်ထရိုက်တိုင်းတာခြင်းဖြင့် ထုတ်လုပ်မှုမရှိခြင်းကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်12] ရောင်ရမ်းသော ဆိုက်တိုကင်း PGE2၊ TNF- ၏ လျှို့ဝှက်ချက်၊αထုတ်လုပ်သူညွှန်ကြားချက်အရ ELISA kit (R&D စနစ်များ) ကို အသုံးပြု၍ IL-6 အား ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။ NO တွင် SDE ၏သက်ရောက်မှုများနှင့် cytokine ထုတ်လုပ်မှုကို Wallac EnVision ကိုအသုံးပြု၍ 540 nm သို့မဟုတ် 450 nm တွင်ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်™မိုက်ခရိုပြားဖတ်စက် (PerkinElmer)။

၂.၄။ Antiosteoarthritis လုပ်ဆောင်ချက်ကို အကဲဖြတ်ခြင်း။Vivo မှာ

၂.၄.၁။ တိရစ္ဆာန်များ

Sprague-Dawley (7 ပတ်သားအရွယ်) ကြွက်ထီးများကို Samtako Inc. (Osan, Korea) မှ ဝယ်ယူခဲ့ပြီး 12 နာရီ အလင်း/အမှောင်စက်ဝန်းဖြင့် ထိန်းချုပ်ထားသော အခြေအနေအောက်တွင် ထားရှိခဲ့သည်။°C နှင့်စိုထိုင်းဆ % ကြွက်များကို ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် အစားအသောက်နှင့် ရေဖြင့် ထောက်ပံ့ပေးခဲ့သည်။ကြော်ငြာ libitum. စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်းအားလုံးသည် အမျိုးသားကျန်းမာရေးအင်စတီကျု (NIH) လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်အညီ လုပ်ဆောင်ခဲ့ပြီး Daejeon တက္ကသိုလ် (Daejeon, Korea Republic of the Republic of Animal Care and Use Committee) မှ အတည်ပြုခဲ့သည်။

၂.၄.၂။ ကြွက်များတွင် MIA ဖြင့် OA ၏ Induction

တိရစ္ဆာန်များကို လေ့လာမှုမစတင်မီတွင် ကျပန်းလုပ်ဆောင်ပြီး ကုသရေးအုပ်စုများသို့ တာဝန်ပေးအပ်ခြင်း (အုပ်စုအလိုက်)။ MIA ဖြေရှင်းချက် (3 mg/50μဆားရည် 0.9% L ) ကို ketamine နှင့် xylazine ရောစပ်ထားသော မေ့ဆေးအောက်တွင် ညာဘက်ဒူး၏ အတွင်းပိုင်း နေရာကို တိုက်ရိုက် ထိုးသွင်းသည်။ ကြွက်များကို ကျပန်းအုပ်စုလေးခုအဖြစ် ပိုင်းခြားထားပါသည်- (၁) MIA ထိုးဆေးမပါသော ဆားရည်အုပ်စု၊ (၂) MIA ထိုးဆေး MIA အုပ်စု၊ (၃) SDE ကုသသောအုပ်စု (200 mg/kg) MIA ထိုးဆေးနှင့် (၄)၊ ) အင်ဒိုမီသစင်- (IM-) ကုသသောအုပ်စု (2 mg/kg) MIA ထိုးဆေး။ ကြွက်များကို MIA ဆေးမထိုးမီ 4 ပတ်အလို 1 ပတ်အလို SDE နှင့် IM ဖြင့် ပါးစပ်ဖြင့် စီမံပေးသည်။ ဤလေ့လာမှုတွင်အသုံးပြုသော SDE နှင့် IM ၏သောက်သုံးသောပမာဏသည် ယခင်လေ့လာမှုများတွင် အလုပ်ခန့်ထားသူများအပေါ် အခြေခံထားသည်။10၊13၊14].

၂.၄.၃။ Hindpaw Weight-Bearing Distribution တိုင်းတာချက်များ

OA induction ပြီးနောက်၊ နောက်ကျောများ၏ အလေးချိန်ခံနိုင်ရည်ရှိ မူလဟန်ချက် ပျက်သွားသည်။ အလေးချိန်ခံနိုင်ရည်ရှိမှု အပြောင်းအလဲများကို အကဲဖြတ်ရန် မစွမ်းဆောင်နိုင်သော စမ်းသပ်ကိရိယာ (Linton ကိရိယာ၊ Norfolk၊ UK) ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ကြွက်များကို တိုင်းတာရေးခန်းထဲသို့ ဂရုတစိုက်ထည့်ထားသည်။ နောက်ခြေလက်မှ ထုတ်ပေးသော အလေးချိန်ကို ပျမ်းမျှအားဖြင့် ၃ စက္ကန့်အတွင်း တိုင်းတာသည်။ အလေးချိန် ခွဲဝေမှုအချိုးကို အောက်ပါညီမျှခြင်းဖြင့် တွက်ချက်ခဲ့သည်- [ညာဘက်နောက်ကျောရှိ အလေးချိန်/(ညာဘက်နောက်ကျောရှိ အလေးချိန် + ဘယ်ဘက်နောက်ခြေလက်ရှိ အလေးချိန်)] × 100 [15].

၂.၄.၄။ Serum Cytokine Levels တိုင်းတာခြင်း။

သွေးနမူနာများကို 1,500 g တွင် 10 မိနစ်ကြာ 4°C တွင် အာရုံစူးစိုက်ထားသည်။ ထို့နောက် သွေးရည်ကြည်ကို −70°C တွင် စုဆောင်းပြီး အသုံးပြုသည်အထိ သိမ်းဆည်းထားသည်။ IL-1 အဆင့်များβIL-6၊ TNF-αထုတ်လုပ်သူညွှန်ကြားချက်အရ R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) မှ ELISA kits များကို အသုံးပြု၍ သွေးရည်ကြည်ရှိ PGE2 နှင့် တိုင်းတာခဲ့ပါသည်။

၂.၄.၅။ အချိန်နှင့်တပြေးညီ Quantitative RT-PCR ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။

စုစုပေါင်း RNA ကို TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) သုံးပြီး ဒူးဆစ်တစ်ရှူးမှ ထုတ်ယူခဲ့သည်)၊ SYBR အစိမ်းရောင် (အသုံးချဇီဝစနစ်များ အသုံးပြု၍ ပြောင်းပြန်-ပြန်ကူးပြီး PCR-ချဲ့ထုတ်ခြင်း) Grand Island, NY, USA)။ Real-time quantitative PCR သည် Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR system (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ကို အသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ primer sequence နှင့် probe-sequence ကို ဇယားတွင် ပြထားသည်။1. နမူနာ cDNA များနှင့် GAPDH cDNA ၏ တူညီသော ပမာဏကို ထုတ်လုပ်သူ ညွှန်ကြားချက်အရ DNA polymerase ပါရှိသော TaqMan® Universal PCR မာစတာအရောအနှောဖြင့် ချဲ့ထွင်ခဲ့ပါသည်။ (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) PCR အခြေအနေများသည် 50°C တွင် 2 မိနစ်၊ 94°C တွင် 10 မိနစ်၊ 95°C တွင် 15 စက္ကန့်နှင့် 40 ပတ်အတွက် 60°C တွင် 1 မိနစ်ဖြစ်သည်။ ထုတ်လုပ်သူညွှန်ကြားချက်အရ ပစ်မှတ်ဗီဇ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုအား နှိုင်းယှဉ် Ct (ချဲ့ထွင်မှုအစီအစဉ်နှင့် တံခါးခုံကြားရှိ အမှတ်များကြားတွင် ဖြတ်ကျော်သည့်နေရာရှိ အဆင့်သတ်မှတ်စက်ဝန်းနံပါတ်) နည်းလမ်းကို အသုံးပြု၍ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။

FOB ဈေးနှုန်း-US $0.5 - 9,999 / အပိုင်း

အနည်းဆုံး မှာယူမှု အရေအတွက်-100 Pieces/Pieces

ထောက်ပံ့နိုင်မှု-တစ်လလျှင် 10000 Pieces/Pieces